Nasledujúci text bude trochu suchopárny. Pre laika sa nečíta ľahko, ale jednoduchšie to napísať neviem. Ak sa chcete dozvedieť, čo sa stane po transfekcii buniek (https://www.lakota.sk/blog/spravy-4/transfekcia-54), tak čítajte len poslednú časť.
The polyomavirus simian virus 40 (SV40) is a known oncogenic DNA virus which induces primary brain and bone cancers, malignant mesothelioma, and lymphomas in laboratory animals. Persuasive evidence now indicates that SV40 is causing infections in humans today and represents an emerging pathogen. A meta-analysis of molecular, pathological, and clinical data from 1,793 cancer patients indicates that there is a significant excess risk of SV40 associated with human primary brain cancers, primary bone cancers, malignant mesothelioma, and non-Hodgkin's lymphoma.
"Polyomavírusový opičí vírus 40 (SV40) je známy onkogénny DNA vírus, ktorý u laboratórnych zvierat vyvoláva primárnu rakovinu mozgu a kostí, malígny mezotelióm a lymfómy. Presvedčivé dôkazy teraz naznačujú, že SV40 dnes spôsobuje infekcie u ľudí a predstavuje nový patogén. Metaanalýza molekulárnych, patologických a klinických údajov od 1 793 pacientov s rakovinou naznačuje, že existuje významné nadmerné riziko SV40 spojené s primárnymi rakovinami mozgu, primárnymi rakovinami kostí, malígnym mezoteliómom a non-Hodgkinovým lymfómom."
(Vilchez RA, Butel JS. Emergent human pathogen simian virus 40 and its role in cancer. Clin Microbiol Rev. 2004 Jul;17(3):495-508, table of contents. doi: 10.1128/CMR.17.3.495-508.2004)
When plasmid DNA from the DNA tumor virus SV40 was microinjected into the cytoplasm of growth-arrested cells, the majority of cells showed nuclear localization of the plasmid within 6 to 8 hours. By contrast, plasmids lacking SV40 sequences failed to be imported into the nuclei of cells and in synchronized cells, and remained in the cytoplasm until after cell division. It was further shown that when included on one of these cytoplasmically localizing plasmids, as little as 50 bp of the SV40 enhancer was able to promote plasmid entry into the nucleus with the same kinetics as the full SV40 genome. Previous studies in transfected and microinjected cells pointed to this nuclear import activity, since when plasmids lacking the enhancer sequence were injected into the cytoplasm of dividing cells, they showed 30-fold lower levels of expression than when delivered directly into the nucleus, whereas plasmids containing the SV40 enhancer showed only modestly increased expression after nuclear injection versus that found with cytoplasmic injection. This SV40 sequence, termed a DNA targeting sequence (DTS), has been shown to be active in cell lines derived from monkey, rat, mouse, hamster, chicken, and human origin.
"Keď sa plazmidová DNA z DNA nádorového vírusu SV40 mikroinjektovala do cytoplazmy buniek s pozastaveným rastom, väčšina buniek vykazovala jadrovú lokalizáciu plazmidu v priebehu 6 až 8 hodín. Naopak, plazmidy, ktorým chýbali sekvencie SV40, sa nedokázali importovať do jadier buniek a v synchronizovaných bunkách zostali v cytoplazme až do delenia buniek. Ďalej sa ukázalo, že keď sa zahrnie do jedného z týchto cytoplazmaticky lokalizovaných plazmidov, už 50 bp zosilňovača (= “enhancer“) SV40 dokáže podporiť vstup plazmidu do jadra s rovnakou kinetikou ako celý genóm SV40. Predchádzajúce štúdie na transfekovaných a mikroinjektovaných bunkách poukázali na túto aktivitu jadrového importu, pretože keď boli plazmidy bez sekvencie zosilňovača („enhancer“) injektované do cytoplazmy deliacich sa buniek, vykazovali 30-násobne nižšie úrovne expresie ako pri priamom dodaní do jadra, zatiaľ čo plazmidy obsahujúce zosilňovač („enhancer“) SV40 vykazovali len mierne zvýšenú expresiu po jadrovej injekcii v porovnaní s expresiou zistenou pri cytoplazmatickej injekcii. Táto sekvencia SV40, označovaná ako DNA targeting sequence (DTS), sa ukázala ako aktívna v bunkových líniách pochádzajúcich z opíc, potkanov, myší, škrečkov, kurčiat a ľudí."
(Vaughan EE, DeGiulio JV, Dean DA. Intracellular trafficking of plasmids for gene therapy: mechanisms of cytoplasmic movement and nuclear import. Curr Gene Ther. 2006 Dec;6(6):671-681. doi: 10.2174/156652306779010688)
A ešte z tej istej práce: However, it should be stressed that such sequence-specific nuclear import appears to be important mainly in the absence of cell division. Thus, when cells go through mitosis, any DNA can enter the nuclear space, and as such, these sequences will play little, if any, role in enhancing nuclear import. It is interesting to note that many of the studies that first identified the nuclear envelope as a barrier to gene transfer used plasmids that lacked this SV40 sequence.
"Je potrebné zdôrazniť, že takýto sekvenčne špecifický jadrový import sa zdá byť dôležitý hlavne v prípade, keď nedochádza k deleniu buniek. Keď bunky prechádzajú mitózou (teda, keď sa delia), do jadrového priestoru sa môže dostať akákoľvek DNA, a preto tieto sekvencie zohrávajú len malú, ak vôbec nejakú úlohu pri posilňovaní jadrového importu. Je zaujímavé poznamenať, že mnohé štúdie, ktoré ako prvé identifikovali jadrový obal ako bariéru pre prenos génov, používali plazmidy, v ktorých táto sekvencia SV40 chýbala."
Ak ste to dočítali až sem, tak ste pripravení čítať s porozumením to, čo sa týka mRNA preparátov. Firma Pfizer zverejnila sekvenciu DNA plazmidu („expresného vektoru“), v ktorom je zakódovaný S-proteín (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/OR134577.1). Tu na pozícii 1139 začína 72 bázových párov dlhá sekvencia zosilňovača-enhancera z SV40:
tg tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg
Po jej skončení nasleduje druhá, prakticky taká istá 72 bp sekvencia enhancera, teda taká aká je v SV40:
tg tggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca ta
(A, C, G, T sú písmenká-kódy pre jednotlivé bázy v DNA.)
A teraz MUDr. Soňa Peková, PhD.: https://www.10letters.org/CzechResearch.pdf , str. 13:
„Both Moderna Spikevax and Pfizer BNT162b2 vaccines contain high quantities of the S protein DNA expression cassettes, with quantities comparable to the quantity of mRNA, which is the only declared active molecular ingredient.“
„Vakcíny Moderna Spikevax aj Pfizer BNT162b2 obsahujú vysoké množstvo kaziet s expresiou DNA proteínu S s množstvom porovnateľným s množstvom mRNA, ktorá je jedinou deklarovanou účinnou molekulárnou zložkou.“
Viete, čo je kazeta s expresiou DNA proteínu S? Je to DNA plazmid („expresný vektor“), v ktorom je zakódovaný S-proteín. Nie sú fragmenty „s tupými koncami“ (tzv. blunt ends), ako včera ráno v SRo hákal nemenovaný biochemik. A tieto kazety s expresiou DNA proteínu S sa po injekčnom podaní do organizmu („očkovanie“) transfekciou dostávajú do vnútra buniek. A potom hneď do bunkového jadra...
Záver: U človeka sa do jadra buniek v prípade preparátu firmy Pfizer dostáva tam prítomná DNA vždy, pričom sa celkom radostne môže integrovať do ľudského genómu. V prípade preparátu firmy Moderna sa do jadra buniek DNA vo firemných preparátoch dostáva v prípade, keď sa bunky delia (mitóza).
Dnes som sa pokúsil vysvetliť len jeden aspekt prečo by sa použitie "mRNA preparátov" malo okamžite zastaviť. Tých aspektov je viac, ale o tom niekedy inokedy.
Publikované: 26.04.2025